土壤游離氨基酸（S-FAA）含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法

貨號(hào)：BC5095

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑四：臨用前取1支加1 mL蒸餾水，充分溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存2周；（1支粉劑溶解后可做100T，為了延長(zhǎng)使用時(shí)間，此產(chǎn)品多給1支粉劑）

2、 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg半胱*酸。臨用前加入4.13 mL蒸餾水，得到20 μmol/mL的半胱氨*標(biāo)準(zhǔn)溶液備用，用不完的試劑可以2-8℃保存4周。

產(chǎn)品說(shuō)明：

作為土壤中一類重要的化合物，氨基酸占土壤中全氮的15%-60%，是土壤氮素循環(huán)和植物養(yǎng)分供給過(guò)程中重要的“庫(kù)"和“源"，可通過(guò)礦化作用滿足作物氮素營(yíng)養(yǎng)的需求，也可以被植物直接吸收利用。另外，氨基酸也是土壤微生物重要的氮源，對(duì)于土壤微生物群落結(jié)構(gòu)、數(shù)量和活性均有直接影響。因此，研究土壤中氨基酸含量變化規(guī)律，對(duì)研究土壤氮素循環(huán)，及其對(duì)植物生理生態(tài)變化的影響均有重要意義。

氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應(yīng)在570nm有特征吸收峰；通過(guò)測(cè)定570nm吸光度，來(lái)計(jì)算氨基酸含量。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

臺(tái)式離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽、30-50目篩、無(wú)水乙醇、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、 樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

土樣37℃/自然風(fēng)干后過(guò)30-50目篩，稱取約0.15g土樣，加試劑一1mL，振蕩2h，10000rpm離心10min，取上清液，待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至570nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：取60μL 20μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液加入140μL蒸餾水得6μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3. 操作表：（在EP管中進(jìn)行）

混勻后蓋緊瓶蓋（纏封口膜防止水分散失），置于沸水浴中保溫15min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，8000rpm離心5min后取上清，于570nm測(cè)定吸光值，分別記為A測(cè)定管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管，并計(jì)算ΔA測(cè)定管=A測(cè)定管-A空白管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)管=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管，顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完。標(biāo)準(zhǔn)管、空白管只需做1-2次。

三、S-FAA含量計(jì)算

S-FAA含量（μmol/g 土樣）=（C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管）÷（V樣÷V樣總×W）

= 6×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管÷W

C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，6μmol/mL；V標(biāo)準(zhǔn)品：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.04mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.04mL；V樣總：樣本總體積，1mL。

注意事項(xiàng)：

1、 試劑四均需臨用前配制，且避光保存。

2、 脯*酸和羥脯*與茚三酮反應(yīng)在570nm處無(wú)吸收峰，因此，570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

3、 如果ΔA測(cè)定管大于1，建議將樣本上清液用試劑一稀釋后進(jìn)行測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1、 取0.15g土樣加入1mL試劑一進(jìn)行樣本處理，取上清后按照測(cè)定步驟操作，使用96孔板測(cè)得A測(cè)定管=0.304、A標(biāo)準(zhǔn)管=0.603、A空白管=0.064，計(jì)算ΔA測(cè)定管=A測(cè)定管-A空白管=0.304-0.064=0.240，ΔA標(biāo)準(zhǔn)管=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.603-0.064=0.539，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：

S-FAA（μmol/g土樣）=6×ΔA測(cè)定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管÷W=6×0.240÷0.539 ÷0.15=17.811 μmol/g 土樣。

參考文獻(xiàn)：

[1] Wang X, Cui X Y, Guo Y F A study on free amino acid in different forest types soil of cold-temperate forest region[J]. Journal of Nanjing Forestry University (Natural Science Edition), 2016, 59(04): 42-48.

[2] Wang B, Jiang Y Y, Jiao J G, et al. Effects of earthworm on constituent and amount of amino acid in soil[J]. Acta Ecologica Sinica, 2015,35(14):4816-4823.

[3] Zhang X J, Wang W Y, Li W Q, et al. Dynamics of soil dissolved organic nitrogen in alpine meadow[J]. Journal of Lanzhou University: Natural Sciences, 2016, 52(5):623-627.

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