5'-核苷酸酶活性檢測試劑盒其他系列

產(chǎn)品簡介：

儲存條件
-20℃
中文名稱
5'-核苷酸酶活性檢測試劑盒其他系列
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
5'-nucleotidase（5'-NT）Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品型號：BC4590-50T/24S

更新時間：2024-03-22

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：814

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

5'-核苷酸酶（5'-NT）活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC4590

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體30 mL×1瓶	-20℃保存
試劑一	粉劑×2支	-20℃保存
試劑二	液體12 mL×2瓶	2-8℃保存
試劑三	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑四	液體25 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑五	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑六	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑七	液體12 mL×1瓶	常溫保存
標準品	粉劑×1瓶	2-8℃保存

溶液的配制：

1、試劑五：臨用前加入12 mL蒸餾水，充分溶解，用不完的試劑2-8℃保存兩周。

2、試劑六：臨用前加入12 mL蒸餾水，充分溶解，用不完的試劑2-8℃保存兩周。

3、工作液配制：臨用前取1支試劑一中加入到1瓶試劑二中充分溶解；用不完的試劑-20℃分裝保存一周，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4、定磷試劑的配制：按H₂O：試劑五：試劑六：試劑七=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷試劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染（請根據(jù)需要，用多少配多少）。

5、標準品：8 mg磷標準品。臨用前加入4.6 mL試劑四溶解配制成10 μmol/mL的標準溶液，溶解后2-8℃保存兩周。

產(chǎn)品說明：

5'-核苷酸酶(5'-NT)是一種對底物特異性不高的水解酶，可作用于多種核苷酸。廣泛存在于各種植物、動物組織、血清血漿中。5'-NT是一種特殊的磷酸酯水解酶，它只作用于核苷-5'-磷酸如AMP(腺苷-5'-磷酸或腺苷酸)生成無機磷酸和核苷。通過定磷顯色法測定所生成的無機磷含量，可以計算出5'-NT的活性高低。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

天平、可見分光光度計、臺式離心機、低溫離心機、恒溫水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1 mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

1. 組織：按照質(zhì)量（g）﹕提取液體積(mL)為 1﹕5-10 的比例（建議稱取約0.1 g，加入1 mL提取液），冰上勻漿后于4℃，15000 g離心10 min，取上清置于冰上待測。

2. 細胞：按照細胞數(shù)量（10⁴個）﹕蒸餾水體積（mL）為500-1000﹕1 的比例（建議500萬個細胞加入1 mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300 W，超聲3 s，間隔7 s，總時間3 min）；然后4℃，15000 g 離心10 min，取上清置于冰上待測。

3. 血清：直接檢測。

二、測定步驟

1、分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、將標準品用試劑四稀釋至0.48、0.24、0.12、0.06、0.03、0.015 μmol/mL標準液。

3、標準品稀釋表

序號	稀釋前濃度（µmol/mL）	標準液體積（µL）	試劑四體積（µL）	稀釋后濃度（µmol/mL）
1	10	48	952	0.48
2	0.48	500	500	0.24
3	0.24	500	500	0.12
4	0.12	500	500	0.06
5	0.06	500	500	0.03
6	0.03	500	500	0.015

實驗中每個標準管需400µL標準溶液。

4、操作表（在1.5 mL EP管中操作）

（1）酶促反應(yīng)

試劑名稱（μL）	測定管	對照管
樣本	100	100
工作液	400
漩渦混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（植物及其他）反應(yīng)30 min
試劑三	500	500
工作液	-	400
漩渦混勻，25℃，8000 rpm離心10 min，取上清進行顯色反應(yīng)

（2）顯色反應(yīng)

試劑名稱（μL）	測定管	對照管	標準管	空白管
上清液	400	400	-	-
標準液	-	-	400	-
試劑四	-	-	-	400
定磷試劑	800	800	800	800
漩渦混勻，40℃顯色10 min；取1 mL反應(yīng)液于1 mL玻璃比色皿中，在660 nm下測定吸光值A，分別記為 A測定、A對照、A標準、A空白，計算ΔA標準=A標準-A空白，ΔA測定=A測定-A對照（標準曲線和空白管只需測定1-2次）。

三、5'-NT活性計算

1、標準曲線的繪制：

以各個標準溶液的濃度為x軸，其對應(yīng)的ΔA標準為y軸，繪制標準曲線，得到標準方程y= kx+b，將ΔA帶入方程得到x（μmol/mL）。

2、 5'-NT活性的計算

（1）按樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生1 nmol 無機磷定義為一個酶活性單位。

5'-NT酶活（U/mg prot）=x×V反總÷(V樣×Cpr)÷T×10³=333.3×x÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義：每克組織在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生1 nmol 無機磷定義為一個酶活單位。

5'-NT酶活（U/g 質(zhì)量）=x×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T×10³=333.3×x÷W

（3）按細胞數(shù)計算：

酶活單位定義：每10⁴個細胞在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生1 nmol 無機磷定義為一個酶活性單位。

5'-NT酶活（U/10⁴ cell）=x×V反總÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T×10³=333.3×x÷細胞數(shù)量

（4）按液體體積計算：

酶活單位定義：每毫升液體在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生1 nmol 無機磷定義為一個酶活性單位。

5'-NT酶活（U/mL）=x×V反總÷V樣÷T×10³=333.3×x

V樣：酶促反應(yīng)中加入樣本體積，0.1 mL；V反總：酶促反應(yīng)總體積，1 mL；V樣總：加入提取液的體積，1 mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；細胞數(shù)量：以萬計；T：酶促反應(yīng)時間，30 min；10³：單位換算，1 μmol=10³nmol。