對(duì)F-actin進(jìn)行定性和定量分析 羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽
貨號(hào)：CA1610
規(guī)格：300T
英文名稱 : TRITC Phalloidin 
別名 : 羅丹明鬼筆環(huán)肽 
分子式 : C60H70N12O13S2 
分子量 : 1231.4 
外觀（性狀） : 紫色粉末（凍干粉） 
單位 : 瓶

溶解性（Solubility）:溶于DMSO、DMF、甲醇或者乙腈水溶液（20%）
多肽序列（Sequence）:TRITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6)

背景描述
    鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）的環(huán)狀七肽毒素，以高親和力（Kd= 20 nM）選擇性結(jié)合于絲狀肌動(dòng)蛋白F-actin，而不會(huì)與單體肌動(dòng)蛋白G-actin結(jié)合，通常用來標(biāo)記組織切片，細(xì)胞培養(yǎng)物或無(wú)細(xì)胞體系中的F-actin，從而對(duì)F-actin進(jìn)行定性和定量分析。另外，鬼筆環(huán)肽衍生物也以相近的親和力結(jié)合于大小纖維，無(wú)論是動(dòng)植物來源的肌肉細(xì)胞或非肌肉細(xì)胞，按照每一個(gè)肌動(dòng)蛋白亞基約與一個(gè)鬼筆環(huán)肽分子的計(jì)量比結(jié)合。且非特異性結(jié)合幾乎可忽略，染色區(qū)域和非染色區(qū)域辨識(shí)度非常明顯。因此，鬼筆環(huán)肽衍生物特別適合替代肌動(dòng)蛋白（Actin）抗體進(jìn)行相關(guān)研究。另外鬼筆環(huán)肽衍生物很小，直徑約12-15?，分子量＜2000 Daltons，未標(biāo)記肌動(dòng)蛋白（Actin）的許多生理特性都得以維持，比如，同肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能發(fā)生反應(yīng)；鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質(zhì)；以及甘油抽提的肌纖維標(biāo)記后仍可收縮等。

    鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）的結(jié)合阻止絲狀肌動(dòng)蛋白（微絲）的解離，穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu)，從而破壞微絲的聚合-去聚合的動(dòng)態(tài)平衡。此特性使得肌動(dòng)蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度（CC）降＜1μg/mL，因此，可用作一種聚合促進(jìn)劑。此外，鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。

    本品為TRITC（四甲基異硫氰酸羅丹明）標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽，染色反應(yīng)特異性強(qiáng)，對(duì)比性高，具有比Actin抗體更好的染色效果，適合用作F-actin的定性和定量檢測(cè)。另外，經(jīng)本品結(jié)合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學(xué)特性。且本品的結(jié)合沒有物種差異性，適用性廣泛。

    我司提供儲(chǔ)存液形式（貨號(hào)：CA1610，濃度為20μM）的TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽，用戶根據(jù)自身需求選擇。建議使用濃度為80~200nM。

運(yùn)輸與保存方法

    冰袋運(yùn)輸。-20℃避光干燥保存， 1年有效。

注意事項(xiàng)

1）鬼筆環(huán)肽具有毒性，需小心操作（對(duì)人的半數(shù)致死劑量LD50約2mg/kg）。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

需要自備材料

1）（可選）甲醇
2）1×PBS緩沖液, pH 7.4, 細(xì)胞培養(yǎng)（貨號(hào)：P1020）
3）固定液4%多聚甲醛（溶于PBS緩沖液）（貨號(hào)：P1110）
4）丙酮或透化液0.5% Triton X-100（溶于PBS緩沖液）
5）Fluoromount-GTM 水溶性封片劑（不含DAPI），DAPI
6）（可選）DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片劑（含DAPI）
7）（可選）BSA，標(biāo)準(zhǔn)
8）載玻片和蓋玻片
9）蓋玻片周圍密封液（如透明指甲油）
10）組裝有TRITC激發(fā)/發(fā)射濾片，以及DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片的熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡

操作步驟

1. 工作液準(zhǔn)備

    對(duì)于TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽（貨號(hào)：CA1610，300T）

    本品以溶于甲醇的20μM儲(chǔ)存液形式提供，總量為300μl。按照100 nM的工作液濃度來?yè)Q算，可制備總量為60 ml的工作液。建議收到產(chǎn)品后，根據(jù)單次使用量，對(duì)母液進(jìn)行小量分裝，-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。

    開始實(shí)驗(yàn)前，使用1×PBS緩沖液稀釋儲(chǔ)存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為：80~200nM。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.染色步驟

1）細(xì)胞爬片生長(zhǎng)24h，使其密度達(dá)到50%匯合度。

2）吸掉培養(yǎng)液，37℃預(yù)熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細(xì)胞2次。

3）使用溶于PBS的4%甲醛溶液進(jìn)行細(xì)胞固定，室溫固定10min。

注意：避免固定劑中含有甲醇成分，因?yàn)榧状荚诠潭ㄟ^程中可能破壞肌動(dòng)蛋白。

4）室溫條件下，用PBS清洗細(xì)胞2~3次，每次10min。

5）室溫條件下，用丙酮（≤-20℃）脫水或者用0.5% Triton X-100溶液透化處理5min。

6）室溫條件下，用PBS清洗細(xì)胞2~3次，每次10min。

7）取200μl配制好的TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽工作液，覆蓋住蓋玻片上的細(xì)胞，室溫避光孵育30min（通常情況下，4℃~37℃孵育皆可）。

注意：為了降低背景，可于TRITC標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽工作液內(nèi)加入1% BSA；另外，孵育過程中為了避免溶液揮發(fā)，可將蓋玻片轉(zhuǎn)移到一個(gè)密封的容器內(nèi)。

8）用PBS清洗蓋玻片3次，每次5min。

9）使用200μl DAPI溶液（濃度：100 nM）對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染，約30s。

10）用PBS清洗蓋玻片，然后倒置在已經(jīng)滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片劑的載玻片上。使用紙巾輕輕檫掉多余封片劑，然后用指甲油*封片。此法制備的標(biāo)本玻片可置于4℃避光保存，通常6個(gè)月內(nèi)可繼續(xù)做F-actin染色分析。

注意：也可以直接使用含有DAPI的抗熒光淬滅封片劑（貨號(hào)：36308ES11）合并步驟9）10），簡(jiǎn)化步驟。

11）熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察，選擇TRITC激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=545/570nm）和DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=364/454nm）。

對(duì)F-actin進(jìn)行定性和定量分析 羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽訂購(gòu)說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運(yùn)輸說明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。