蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)試
劑盒說(shuō)明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。
貨號(hào)：BC1275
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：使用前根據(jù)樣本數(shù)，每支加1mL水震蕩溶解后離心取上清使用，每支為10個(gè)樣本用量，溶液變黑后即不可再繼續(xù)使用。

2. 試劑五：自備乙酸乙酯和無(wú)水乙醇，根據(jù)測(cè)定樣本量，將乙酸乙酯和無(wú)水乙醇等體積混合。（提供1個(gè)60mL空瓶）

產(chǎn)品說(shuō)明：
蛋白質(zhì)羰基化是指氨基酸殘基側(cè)鏈中的氨基或亞氨基受到氧自由基攻擊最后轉(zhuǎn)變成醛基，并釋放NH₃⁺的過(guò)程.其在體內(nèi)的形成主要是通過(guò)金屬離子催化氧化系統(tǒng)完成。蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過(guò)程中的早期標(biāo)志，其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小，是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。
羰基與2,4--*反應(yīng)生成2,4-*腙，在370nm處有特征吸收峰。
Protein Carbonyl + 2, 4-Dinitrophenylhydrazine              2, 4-Dinitrobenzene (370nm)
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
天平、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱、低溫離心機(jī)、超聲細(xì)胞破碎儀、漩渦震蕩儀、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器、蒸餾水、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：
1. 試劑一使用前根據(jù)要測(cè)定的樣本數(shù)現(xiàn)配，配置好后4℃保存，若變?yōu)楹谏?，則不能使用。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g小鼠心臟加入1mL提取液充分勻漿后于4℃，5000rpm離心10min，取上清，加入0.1mL試劑一，室溫放置10min，4℃，12000rpm離心10min，取上清，按照測(cè)定步驟操作，用96孔UV板測(cè)得A_{370測(cè)定管}=0.723，A_{370對(duì)照管}=0.609，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/g質(zhì)量）=（A_{370測(cè)定管}-A_{370對(duì)照管}）÷9.6÷W=0.1188 μmol/g質(zhì)量。

1. 取0.1g國(guó)槐加入1mL提取液充分勻漿后于4℃，5000rpm離心10min，取上清，加入0.1mL試劑一，室溫放置10min，4℃，12000rpm離心10min，取上清，按照測(cè)定步驟操作，用96孔UV板測(cè)得A_{370測(cè)定管}=0.127，A_{370對(duì)照管}=0.071，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/g質(zhì)量）=（A_{370測(cè)定管}-A_{370對(duì)照管}）÷9.6÷W=0.0583 μmol/g質(zhì)量。

1. 取胎牛血清樣本按照說(shuō)明步驟操作，直接測(cè)定，用96孔UV板測(cè)得A_{370測(cè)定管}=0.344，A_{370對(duì)照管}=0.145，按液體體積計(jì)算酶活得：

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mL）=（A_{370測(cè)定管}-A_{370對(duì)照管}）÷10.56=0.0188 μmol/mL。
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