嘌呤霉素
貨號(hào)：P8230
規(guī)格：25mg/100mg
英文名稱(chēng) : Puromycin 
CAS : 58-58-2 
分子式 : C22H29N7O5·2HCl 
分子量 : 544.43 
儲(chǔ)存條件 : -20℃ 
純度 : ≥98%(TLC) 
單位 : 支 
外觀（性狀） : 白色或白中帶有黃色的粉末

• 別名 : 二鹽酸嘌呤霉素；鹽酸鹽
• 危險(xiǎn)代碼 : R:22

說(shuō)明：蛋白質(zhì)合成抑制劑。抑制細(xì)菌、藻類(lèi)原生物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。

     （Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類(lèi)抗生素，通過(guò)抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽(yáng)性菌，各種動(dòng)物和昆蟲(chóng)細(xì)胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機(jī)制在于是氨酰-tRNA分子3’末端的類(lèi)似物，能夠與核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合并摻入到延伸的肽鏈中。同A位點(diǎn)結(jié)合后，不會(huì)參與隨后的任何反應(yīng)，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有的不成熟多肽。

     產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼N-乙酰轉(zhuǎn)移酶（PAC），賦予機(jī)體對(duì)產(chǎn)生抗性。這一特性如今普遍應(yīng)用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。

    在細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選中的普遍應(yīng)用與慢病毒載體的特性有關(guān)，現(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因。在某些特定情況下，亦可以用來(lái)篩選轉(zhuǎn)化攜帶pac基因質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。

     抗菌機(jī)理在于作用于細(xì)菌核糖體30S亞單位，抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成而發(fā)揮抗菌作用；也可導(dǎo)致mRNA遺傳三連體密碼閱讀錯(cuò)誤， 翻譯形成無(wú)意義的蛋白質(zhì)；也可依靠離子吸附于菌體表面，造成細(xì)胞膜損傷。導(dǎo)致膜通透性增加，使胞內(nèi)一些重要生命物質(zhì)外漏，使細(xì)菌死亡。

   溶解性：溶于水，參考濃度50mg/ml。

使用方法

1.建議使用濃度

     哺乳動(dòng)物細(xì)胞：1-10 μg/mL，佳濃度需要?dú)缜€來(lái)確定；

     大腸桿菌：LB瓊脂培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)化pac基因的大腸桿菌，使用濃度為125μg/mL。注：使用篩選大腸桿菌穩(wěn)轉(zhuǎn)株需要的pH值調(diào)節(jié)，而且受宿主細(xì)胞本身的影響。

2.溶解方法

    用蒸餾水溶解配制成50 mg/ml的母液，經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌后分裝于-20℃凍存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的儲(chǔ)存液。

3. 殺滅曲線的確定（以shRNA轉(zhuǎn)染或者慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)為例）

    有效篩選濃度跟細(xì)胞類(lèi)型、生長(zhǎng)狀態(tài)、細(xì)胞密度、細(xì)胞代謝情況及細(xì)胞所處細(xì)胞周期位置等有關(guān)。為了篩選到穩(wěn)定表達(dá)的shRNA細(xì)胞株，確定殺死未轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的低濃度關(guān)重要。建議初次做實(shí)驗(yàn)的客戶(hù)一定要建立適合自身實(shí)驗(yàn)體系的殺死曲線（kill curve）。

    1） Day 1：24孔板內(nèi)以5~8 x 104 cells/孔的密度鋪板，鋪?zhàn)銐蛄康目滓赃M(jìn)行后續(xù)的梯度實(shí)驗(yàn)。37℃細(xì)胞孵育；

    2） Day 2：a）準(zhǔn)備篩選培養(yǎng)基：含不同濃度的新鮮培養(yǎng)基（如0-15μg/mL，少5個(gè)梯度）；b）往孵育后的細(xì)胞內(nèi)更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基；之后37℃孵育細(xì)胞；

   3） Day 4：更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀察細(xì)胞存活率。

   4） 根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基；

   5） 每日監(jiān)測(cè)細(xì)胞，觀察存活細(xì)胞率，從而確定抗生素篩選開(kāi)始4-6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染或者所有非轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的藥物低濃度。

4. 哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選

    等轉(zhuǎn)染含有pac基因的質(zhì)粒后，細(xì)胞在含有的培養(yǎng)基中增殖，以篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子。

    1）細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h后，將細(xì)胞（原樣或稀釋?zhuān)┲糜诤羞m當(dāng)濃度的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

注意：當(dāng)細(xì)胞處于活躍期時(shí)，抗生素作用明顯。細(xì)胞過(guò)于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會(huì)明顯下降。好進(jìn)行細(xì)胞分盤(pán)使其密度不超過(guò)25%。

    2）每隔2-3天，移除和更換含有的培養(yǎng)基。

    3）篩選7天后評(píng)估細(xì)胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時(shí)間，這依賴(lài)于宿主細(xì)胞系和轉(zhuǎn)染篩選效率。注意：每日進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察。的篩選少需要48h，有效濃度的篩選周期一般在3-10天。

    4）轉(zhuǎn)移和放置5-10個(gè)抗性克隆到一個(gè)35mm的培養(yǎng)皿中，用選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天。此次富集培養(yǎng)是為日后的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2）為有毒化合物，操作時(shí)請(qǐng)小心拿放。

Puromycin dihydrochloride hydrate
Catalog Number： P8230
Specifications
Purity:  ≥98%(TLC)
Physical Appearance: White to off-white powder
Storage
Desiccate at -20° C
Properties
Molecular Weight:  544.43
Molecular Formula:  C22H29N7O5·2HCl
Solubility: Soluble in water (50 mg/ml)
Product Description
Puromycin belongs to the amino-nucleoside family of antibiotics and is isolated from Streptomyces alboniger. Since the
partial structure of this antibiotic showed it to be a purine derivative, puromycin was assigned as its generic name.
Puromycin is a broad spectrum antibiotic and antibacterial agent. It is active against Gram-positive microorganisms,
less active against acid-fast bacilli, and weakly active against Gram-negative microorganisms.It acts very quickly and
can kill 99% of the cells within 2 days. It also exhibits antitumor activity in studies on brain tumor cells.
Puromycin is a protein synthesis inhibitor that causes premature chain termination by acting as an analog of the
3’-terminal end of aminoacyl-tRNA. It has been used to study transcriptional regulatory mechanisms that control the
sequential and coordinate expression of genes during cell differentiation.
Usage:
A stock solution of 10 mg/mL(in water ) should be sterilized by filtration through a 0.22um filter and stored frozen. It
is tested on HeLa cells for cell growth arrest and selection of cells after transfection of the pac resistance gene. Hela
cells were found to be resistant to a concentration of 0.1-0.3ug/ml and sensitive to a concentration in the range of 1-10
ug/ml.
For selection of pac-containing colonies after transfection it is better to use the antibiotic supplemented in the cell
medium 2 days after transfection, in the range of 1-6 ug/ml. Colonies will appear 7-10 days after transfection.
The optimal working concentration of puromycin varies between cell lines. Usually, the working concentration
for eukaryote cell culture is 1-10ug/ml.
Storage/Stability
Store the product at –20 °C. Under these conditions, the product remains active for two years.

訂購(gòu)說(shuō)明：
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運(yùn)輸說(shuō)明：
1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶(hù)的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶(hù)的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。

產(chǎn)品實(shí)物圖：