2016-421
瑞氏-姬姆薩染色液是利用Romanowsky??Stain?技術(shù)原理改良而成的。主要應(yīng)用于血液和骨髓涂片染色。姬姆薩染色液對胞漿著色力較強(qiáng),能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度,著色清晰,色澤純正,但是對胞核著色偏深,核結(jié)構(gòu)顯示較差。瑞氏-姬姆薩染色液原理瑞氏-姬姆薩染色液主要應(yīng)用于血液和骨髓涂片染色,它是利用Romanowsky??Stain?技術(shù)原理改良而成的。細(xì)胞的著色過程是染料透入被染物并存留其內(nèi)部的一種過程,此過程既有物理吸附作用,又有化學(xué)親和作用。各種細(xì)胞及細(xì)胞的各種成分...
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2016-421
嘌呤霉素(puromycin;PM)是一種蛋白質(zhì)合成抑制劑,它具有與tRNA分子末端類似的結(jié)構(gòu),能夠同氨基酸結(jié)合,代替氨?;膖RNA同核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合,并摻入到生長的肽鏈中。用嘌呤霉素篩選細(xì)胞方法如下:嘌呤霉素篩選細(xì)胞轉(zhuǎn)染(24孔板進(jìn)行)或電轉(zhuǎn)后培養(yǎng)24小時,按10%密度傳代(傳36mm平皿),繼續(xù)培養(yǎng)24小時,待細(xì)胞密度增20%-25%回合時;去掉培養(yǎng)液,PBS洗一次,加入按照佳嘌呤霉素篩選細(xì)胞的濃度(殺傷曲線試驗(yàn)確定)配制好的嘌呤霉素篩選細(xì)胞培養(yǎng)基2-3ml。根據(jù)培養(yǎng)...
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2016-421
嘌呤霉素(puromycin;PM)是一種抗生素,廣泛用作蛋白質(zhì)合成的抑制劑。其結(jié)構(gòu)與氨酰tRNA3′端上的AMP結(jié)構(gòu)相似,肽酰轉(zhuǎn)移酶能促使氨基酸與嘌呤霉素結(jié)合形成肽酰嘌呤霉素,從核糖體上脫落,從而使蛋白質(zhì)合成反應(yīng)中斷。嘌呤霉素的作用如下:嘌呤霉素的作用:嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑鏈霉菌(Streptomycesalboniger)發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,嘌呤霉素Puromycin通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽性菌,各種動物和昆蟲細(xì)胞。嘌呤霉素Pur...
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2016-420
Bradford法測蛋白濃度是利用蛋白質(zhì)-染料結(jié)合的原理,定量地測定微量蛋白質(zhì)濃度的快速靈敏的方法。Bradford法測蛋白濃度原理考馬斯亮藍(lán)(CBB)測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種??捡R斯亮藍(lán)在游離狀態(tài)下呈紅色,大光吸收在488nm;當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?,蛋白質(zhì)—色素結(jié)合物在595nm波長下有大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比,因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)結(jié)合在2min左右的時間內(nèi)達(dá)到平衡,完成反應(yīng)十分迅速;其結(jié)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。該...
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2016-420
Bradford法又稱考馬斯亮藍(lán)法,是Bradford于1976年建立起來的一種蛋白質(zhì)濃度的測定方法。bradford法定量蛋白質(zhì)的原理是馬斯亮藍(lán)(CBB)測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種??捡R斯亮藍(lán)在游離狀態(tài)下呈紅色,大光吸收在488nm;以下是bradford法定量蛋白質(zhì)的原理及含量測定流程bradford法定量蛋白質(zhì)的原理考馬斯亮藍(lán)(CBB)測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種??捡R斯亮藍(lán)在游離狀態(tài)下呈紅色,大光吸收在488nm;當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?,蛋白質(zhì)—色素...
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2016-419
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。胎牛血清是血清中的一種,是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清。胎牛血清是品質(zhì)高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分少。胎牛血清的主要作用1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂...
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2016-419
TBS緩沖液是Tris-HCl緩沖鹽溶液,為等滲鹽溶液加Tris-HCl緩沖液。屬于常規(guī)pH緩沖液,常用于清洗免疫染色的組織或Western?Blot?中的蛋白印跡膜等,是常用分子生物學(xué)試劑。TBS緩沖液(0.05mol/L,pH7.4)主要由Tris、氯化鈉、BSA、防腐劑等組成,可用于免疫金銀染色中清洗組織,亦可作為封閉液的基礎(chǔ)試劑。Tris緩沖鹽水(TBS):10mmol/L,Tris含0.9%NaCl,用1NHC1調(diào)pH7.4;操作步驟(僅供參考):1、石蠟切片脫蠟水...
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2016-419
PDA培養(yǎng)基作用:PDA(PotatoDextroseAgar(Medium))培養(yǎng)基又稱馬鈴薯葡萄糖瓊脂,是一種半合成培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基。宜培養(yǎng)酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。PDA培養(yǎng)基的配制:(僅供參考)(1)稱量和熬煮按培養(yǎng)基配方逐一稱取去皮土豆。土豆切成小塊放入鍋中,加水1000ml,在加熱器上加熱沸騰,維持20-30min,用可用2層紗布趁熱在量杯上過濾,濾渣棄取。濾液補(bǔ)充水分到1000ml。(2)加熱溶解把濾液放入鍋中,加入葡萄糖20g,瓊脂15~20g(提前搞碎),...
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