2016-53
RNA酶抑制劑具有廣譜的RNA酶抑制作用,包括中性的真核生物的RNA的抑制作用。?分子量是50kDa的蛋白質(zhì)通過非共價鍵與RNA酶以1:1的比例結(jié)合發(fā)揮它的抑制作用。RNA酶抑制劑與RNA酶結(jié)合的有效濃度時10-14M。而且,RNA酶抑制劑的動力學結(jié)合是非常迅速的,確保與RNA酶的迅速絡合,并對其產(chǎn)生迅速的抑制作用。常見的RNA酶抑制劑1、焦碳酸二乙酯(DEPC):是一種強烈但不*的RNA酶抑制劑,他通過和RNA酶的活性基因團組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性,從而抑制酶的活性。...
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2016-53
RNA的化學性質(zhì)比DNA活躍得多。RNA分子上緊鄰磷酸二脂鍵的2′羥基基團能直接被RNA酶利用來作為活性因子,從而使得RNA酶無需金屬離子就能發(fā)揮活性。由于RNA酶在環(huán)境中廣泛存在,特別是RNaseA,結(jié)構(gòu)極其穩(wěn)定,不能通過高溫高壓滅菌失活,因而極難消除,對保持RNA樣品的完整性構(gòu)成極大的威脅。由于RNaseA類酶依賴于活性位點處的組氨酸殘基起催化作用,因此能被組氨酸烷化劑DEPC所抑制。避免RNA酶的污染的方法:1.塑料制品:盡可能使用無菌、一次性塑料制品。已標明RNase...
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2016-427
福林酚法測蛋白含量早是由Lowry確定的測定蛋白質(zhì)濃度的基本方法。以后在生物化學領域得到廣泛的應用。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即Folin—酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質(zhì)的靈敏度。福林酚法測蛋白含量原理:蛋白質(zhì)與福林酚試劑反應,生成深藍色復合物.藍色的深淺與蛋白質(zhì)含量成正比.可用分光光度計于500nm波長下進行測定.與標準曲線對照,而確定蛋白質(zhì)含量.福林酚法測蛋白含量所需試劑Folin—酚試劑:1.試劑甲1)4%碳酸鈉溶液2)0.2...
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2016-427
異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用*的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實驗室廣泛應用。當有乳糖存在時,lac操縱子(元)即可被誘導。在這個操縱子(元)體系中,真正的誘導劑并非乳糖本身。乳糖進入細胞,經(jīng)b-半乳糖苷酶催化,轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘?。后者作為一種誘導劑分子結(jié)合阻遏蛋白,使蛋白構(gòu)象變化,導致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。材料1、誘導表達材料(1)LB(Luria—Bertani))培養(yǎng)基酵母膏(Yeastextract)5g蛋白胨(Peptone)10gNaCl1...
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2016-427
異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名稱IPTG。為安慰性誘導物,X-gal為生色底物,二者共同用于藍白斑篩選。IPTG可誘導載體lac操縱子DNA區(qū)段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段,該片段可與宿主細胞編碼的缺陷型β-半乳糖苷酶實現(xiàn)基因內(nèi)互補(α互補)。IPTG誘導原理先E.coli的乳糖操縱子(元)含Z、Y及A三個結(jié)構(gòu)基因,分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙?;D(zhuǎn)移酶,此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調(diào)節(jié)?基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白,后者與O序列結(jié)合,使操縱子(元)受...
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2016-426
CCK-8為細胞增殖檢測試劑盒,細胞增殖是生物體的重要生命特征,細胞以分裂的方式進行增殖。必須強調(diào)指出,通過細胞分裂,可以將復制的遺傳物質(zhì),平均地分配到兩個子細胞中去??梢姡毎鲋呈巧矬w生長、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎。CCK8實驗步驟如下。CCK-8實驗步驟1、在96孔板中配置100μl的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時(37℃,5%CO2)。2、向培養(yǎng)板加入10μl不同濃度的待測物質(zhì)。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間(例如:6、12、24或48小時)。4、向...
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2016-426
CellCountingKit-8簡稱CCK-8試劑盒,為MTT法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒??捎糜谒幬锖Y選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗?;盍τ嬎悖?細胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)]×100A(加藥):具有細胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度...
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2016-426
IPTG是一種作用*的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實驗室廣泛應用。IPTG溶液的配制很簡單:在8ml蒸餾水中溶解2gIPTG后,用蒸餾水定容10ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃。IPTG的使用方法:先把IPTG配制成24mg/ml(100mM)的水溶液,并進行過濾除菌后保存。然后在100ml的瓊脂培養(yǎng)基中,加入100μl的上述溶液、200μl的X-Gal(20?mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100μl的Amp(100mg/...
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