2016-921
DNA產(chǎn)物純化試劑盒簡介:對于TA克隆、酶切或者直接測序等試驗來說,純化PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物是非常必要的。以TA克隆為例,其成功率跟目的片段的純度高低有重要關(guān)系。雖然未經(jīng)過純化的PCR產(chǎn)物也可以跟載體連接,但會增加篩選陽性克隆的難度,因為PCR產(chǎn)物中的dNTP和引物等可能也會跟載體連接。在進行連接試驗時,這些非特異性的產(chǎn)物會跟特異性產(chǎn)物相互競爭,從而導致連接效率下降。DNA的片段純化回收原理在獲得DNA的片段后,一般采用吸附材料的方法去除雜質(zhì)和純化DNA的片段。目前大多數(shù)生物...
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2016-920
質(zhì)粒提取常見問題常見問題1:可能原因:大腸桿菌老化建議解決方案:請涂布平板培養(yǎng)后,重新挑選新菌落進行液體培養(yǎng)可能原因:質(zhì)粒拷貝數(shù)低建議解決方案:由于使用低拷貝數(shù)載體引起的質(zhì)粒DNA提取量低,可更換具有相同功能的高拷貝數(shù)載體??赡茉?溶液使用不當建議解決方案:溶液P2和P3在溫度較低時可能出現(xiàn)渾濁,應置于37℃保溫一段時間,直溶液變?yōu)榍辶梁蟛拍苁褂?。可能原?質(zhì)粒未全部溶解(尤其質(zhì)粒較大時)建議解決方案:洗脫溶解質(zhì)粒時,可適當加溫或延長溶解時間。可能原因:洗脫液加入位置不正確...
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2016-919
質(zhì)粒提取原理及流程質(zhì)粒提取試劑盒簡介:質(zhì)粒(Plasmid)是一種染色體外的穩(wěn)定遺傳因子,大小從1-200kb不等,為雙鏈、閉環(huán)的DNA分子,并以超螺旋狀態(tài)存在于宿主細胞中。質(zhì)粒主要存在于細菌、放線菌和真菌細胞中,它具有自主復制和轉(zhuǎn)錄能力,能在子代細胞中保持恒定的拷貝數(shù),并表達所攜帶的遺傳信息。質(zhì)粒提取原理及流程:較常用的質(zhì)粒DNA提取方法有3種:堿裂解法、煮沸法和去污劑(如Triton和SDS)裂解法。前兩種方法比較劇烈,適用于較小的質(zhì)粒(15kb)。堿裂解法是一種應用為廣...
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2016-918
基因組DNA提取常見問題分析常見問題1:洗脫產(chǎn)物的DNA量很少或沒有可能原因:所提樣品材料老化或反復凍融導致基因組DNA含量下降建議解決方案:應選擇新鮮的樣品材料,如新鮮血液、新鮮菌液、剛離體的動物組織或幼嫩的植物組織等,不能及時處理的樣品應立即放入液氮或-70℃低溫保存,以免DNA降解??赡茉颍簶悠菲票诨蛄呀獠?導致基因組DNA未充分釋放建議解決方案:動、植物材料應在液氮中充分研磨勻漿,G+細菌、酵母等破壁較困難的樣品應用溶菌酶、酵母破壁酶或機械方式協(xié)助破壁,不同樣品的細...
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2016-818
OCT包埋劑/櫻花冷凍切片包埋劑包埋流程1.將放在蔗糖溶液中的組織塊取出,放入20gL-1蔗糖與OCT包埋劑1:1體積比例混合液中,室溫浸泡2h2.移入OCT包埋劑中室溫浸泡4h,更換新的OCT包埋劑,室溫浸泡6h.3.將標本置于托物臺,用恒冷箱切片機切片(一般-22℃),片厚10μm,貼于預處理的載玻片上,-20℃冰箱保存。
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2016-729
2016-712
溴代十六烷基*胺(CTAB)的使用方法溴代十六烷基*胺簡稱:CTAB,英文名稱Cetyltrimethylammoniumbromide,又稱鯨蠟烷*基溴化銨,十六烷基*基溴化銨,白色粉末狀,是一種季銨鹽溶于水,在酸性溶液中保持穩(wěn)定。是一種陽離子去垢劑,用于從大量產(chǎn)生粘多糖的有機體如植物以及某些革蘭氏陰性菌(包括E.coli的某些株)中制備純化DNA。CTAB結(jié)構(gòu)式原理:CTAB是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性,在這種條件下,蛋白質(zhì)和中性...
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2016-620
微生物中所指的MH是Mueller-Hinton的字母縮寫,指的是水解酪蛋白。而MH培養(yǎng)基指的就是水解酪蛋白(Mueller-Hinton)培養(yǎng)基,可配置成MH血瓊脂培養(yǎng)基用于鏈球菌的藥物敏感實驗。本文主要介紹的是MH培養(yǎng)基如何滅菌合適以及MH培養(yǎng)基的使用方法。MH培養(yǎng)基如何滅菌MH培養(yǎng)基可用濕熱滅菌法,115度30分鐘,作分離馴化蛋白酶的菌。MH培養(yǎng)基的使用方法:1、稱取本品38g,加入蒸餾水或去離子水1L,攪拌加熱煮沸*溶解,分裝三角瓶,121℃高壓滅菌15min,備用....
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